Novi pribor za otkrivanje nukleinske kiseline od koronavirusa (SARS-Cov-2).
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Flurudačascent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Komplet za otkrivanje novog koronavirusa (SARS-Cov-2) nukleinske kiseline (metoda fluorescentne RT-PCR sonde)
【Packaging specakocations 】25 testova/komplet
【Intended usdobi】
Ovaj se pribor koristi za kvalitativnu detekciju nukleinske kiseline iz novog koronavirusa u brisevima nazofarinksa, brisevima orofaringeusa (grla), brisevima prednjeg nosa, brisevima srednje turbinate, nosnim ispiranjima i nazalnim aspiratima pojedinaca za koje njihov liječnik posumnja na COVID19. Detekcija gena ORF1ab i N novog koronavirusa može se koristiti za pomoćnu dijagnostiku i epidemiološko praćenje infekcije novim koronavirusom.
【Principles of the procedure 】
Ovaj komplet je dizajniran za specifične TaqMan sonde i specifične početnice dizajnirane za sekvence ORF1ab i N gena novog koronavirusa (SARS-Cov-2). PCR reakcijska otopina sadrži 3 seta specifičnih primera i fluorescentnih sondi za specifično otkrivanje meta, a dodatni set specifičnih primera i fluorescentnih sondi koristi se kao interna standardna kontrola kompleta za detekciju endogenih kućnih gena.
Načelo ispitivanja je da se specifična fluorescentna sonda probavi i razgradi egzonukleaznom aktivnošću enzima Taq u PCR reakciji, tako da se reporterska fluorescentna skupina i ugašena fluorescentna skupina odvoje, tako da sustav za praćenje fluorescentnosti može primiti fluorescentnu signala, a zatim Učinkom obogaćivanja PCR pojačanja, fluorescentni signal sonde doseže postavljenu graničnu vrijednost - Ct vrijednost (prag ciklusa). U slučaju da nema ciljnog umnožaka, reporterska skupina sonde je blizu skupine za gašenje. U to vrijeme dolazi do prijenosa energije fluorescentne rezonancije, a fluorescenciju reporterske skupine gasi skupina za gašenje, tako da se fluorescentni signal ne može detektirati fluorescentnim PCR instrumentom.
Kako bi se pratila upotreba reagensa tijekom testa, kit je opremljen pozitivnim i negativnim kontrolama: pozitivna kontrola sadrži rekombinantni plazmid ciljnog mjesta, a negativna kontrola je destilirana voda, koja se koristi za praćenje onečišćenja okoliša. Preporuča se postaviti pozitivnu kontrolu i negativnu kontrolu istovremeno pri testiranju.
【Main components 】
| Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Components | |
| Name | specifikacija | Količinanost | Količinanost | |
| Pozitivna kontrola | 180 μL/bočici | 1 | 1 | Umjetno konstruirani plazmidi, destilirana voda |
| Negativna kontrola | 180 μL/bočici | 1 | 1 | Destilirana voda |
| Mješavina SARS-Cov-2 | 358,5 μL/bočici | 1 | / | Specifični parovi primera, specifične detekcijske fluorescentne sonde, dNTP, MgCl2, KCl, Tris-Hcl, destilirana voda itd. |
| Mješavina enzima | 16,5 μL/bočici | 1 | / | Taq enzimi, reverzna transkriptaza, UNG enzimi itd. |
| SARS-Cov-2 mješavina (liofilizirana) | 25 testova po bočici | / | 1 | Specifični parovi primera, specifične detekcijske fluorescentne sonde, dNTP, Taq enzimi, reverzna transkriptaza, destilirana voda, itd. |
| 2x tampon | 375 μL/bočici | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, destilirana voda itd. |
Bilješka:( 1) Komponente u različitim serijskim kompletima ne mogu se miješati ili međusobno mijenjati.
(2) Pripremite vlastiti reagens: pribor za ekstrakciju nukleinske kiseline.
【Storage conditions i expiration date 】
For BST-SARS-25:Transportirajte i čuvajte na -20±5℃ dulje vrijeme.
For BST-SARS-DR-25:Transport na sobnoj temperaturi. Čuvati na -20±5℃ dulje vrijeme.
Izbjegavajte ponovljene cikluse smrzavanja i odmrzavanja. Razdoblje valjanosti okvirno je postavljeno na 12 mjeseci.
Pogledajte naljepnicu za datum proizvodnje i uporabe.
Nakon prvog otvaranja, reagens se može čuvati na -20±5 °C ne dulje od 1 mjeseca ili do kraja razdoblja reagensa, koji god datum nastupi prvi, kako bi se izbjegli ponovljeni ciklusi smrzavanja-odmrzavanja i broj zamrzavanja reagensa -ciklusi odmrzavanja ne smiju biti veći od 6 puta.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1. Primjenjiva vrsta uzorka: ekstrahirana otopina nukleinske kiseline.
2. Skladištenje i transport uzoraka: Čuvajte na -20±5 ℃ 6 mjeseci. Zamrznite i odmrznite uzorke najviše 6 puta.
【Tprocjenaing method】
1.Nucleic acid extraction
Odaberite odgovarajući pribor za ekstrakciju nukleinske kiseline za ekstrakciju virusne nukleinske kiseline i slijedite odgovarajuće upute za komplet. Preporuča se koristiti komplet za ekstrakciju i pročišćavanje nukleinske kiseline koji proizvodi Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. ili ekvivalentni pribor za pročišćavanje nukleinske kiseline.
2. Rsvakition reagent preparation
2.1 For BST-SARS-25:
( 1) Uklonite mješavinu SARS-Cov-2 i mješavinu enzima, potpuno otopite na sobnoj temperaturi i temeljito promiješajte Vortex uređajem, a zatim kratko centrifugirajte.
(2) 16,5 uL mješavine enzima dodano je u 358,5 uL mješavine SARS-Cov-2 i temeljito promiješano kako bi se dobila miješana reakcijska otopina.
(3) Pripremite čistu oktalnu epruvetu za PCR od 0,2 mL i označite je s 15 uL gore navedene miješane reakcijske otopine po jažici.
(4) Dodajte 15 μL pročišćene otopine nukleinske kiseline, pozitivnu kontrolu i negativnu kontrolu i pažljivo pokrijte čep oktalne epruvete.
(5) Dobro promiješajte okretanjem naopačke i brzo centrifugirajte da se tekućina koncentrira na dnu epruvete.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
( 1) Dodajte 375 ul 2x pufera u SARS-Cov-2 mješavinu ((liofiliziranu) kako biste pripremili reakcijsku smjesu. Temeljito promiješajte pipetiranjem i zatim kratko centrifugirajte. （Nakon što se reakcijska smjesa pripremi, preporučuje se čuvanje na -20 ℃ na dugotrajno skladištenje.)
(2) Pripremite čistu oktalnu epruvetu za PCR od 0,2 mL i označite je s 15 μL reakcijske smjese po jažici.
(3) Dodajte 15 μL pročišćene otopine nukleinske kiseline, pozitivnu kontrolu i negativnu kontrolu i pažljivo pokrijte čep oktalne epruvete.
(4) Dobro promiješajte okretanjem naopačke i brzo centrifugirajte da se tekućina koncentrira na dnu epruvete.
3. PCR amplification （Za postavke rada pogledajte priručnik instrumenta.)
3. 1 Postavite PCR 8-epruvetu u komoru za uzorke fluorescentnog PCR instrumenta i postavite uzorak za testiranje, pozitivnu kontrolu i negativnu kontrolu prema redoslijedu punjenja.
3.2 Kanal za otkrivanje fluorescencije:
( 1) Gen ORF1ab odabire kanal detekcije FAM (Izvjestitelj: FAM, gasitelj: nijedan).
(2) N gen odabire kanal detekcije VIC (Izvjestitelj: VIC, gasitelj: nijedan).
(3) Gen internog standarda odabire kanal detekcije CY5 (Reporter: CY5, Quencher: Ništa).
(4) Pasivna referenca postavljena je na ROX.
3.3 Podešavanje parametara PCR programa:
| Korak | Temperatura (℃) | Vrijeme | Broj ciklusa | |
| 1 | Reakcija obrnute transkripcije | 50 | 15 min | 1 |
| 2 | Aktivacija enzima Taq | 95 | 2,5 min | 1 |
| 3 | Aktivacija enzima Taq | 93 | 10 s | 43 |
| Proširenje žarenja i dobivanje fluorescencije | 55 | 30 s | ||
Nakon postavljanja, spremite datoteku i pokrenite reakcijski program.
4.Results analysis
Nakon završetka programa, rezultati se automatski spremaju, a krivulja pojačanja se analizira. Krivulja pojačanja postavljena je na zadani prag instrumenta.
【Explanation of test resuto je 】
1. Odredite valjanost eksperimenta: kanal pozitivne kontrole FAM, VIC trebao bi imati tipičnu krivulju pojačanja, a vrijednost Ct općenito je manja od 34, ali može varirati zbog različitih postavki praga različitih instrumenata. Kanal negativne kontrole FAM, VIC trebao bi biti neamplificirani Ct. Dogovoreno je da gore navedeni zahtjevi moraju biti ispunjeni u isto vrijeme, inače je ovaj test nevažeći.
2. Procjena rezultata
| FAM/VIC kanal | Rezultat presude |
| Ct＜37 | Test uzorka je pozitivan |
| 37≤Ct＜40 | Krivulja pojačanja je u obliku slova S, a sumnjive uzorke potrebno je ponovno ispitati; ako su rezultati ponovnog pregleda dosljedni, ocjenjuje se pozitivnim, u protivnom negativnim |
| Ct≥40 ili nema pojačanja | Test uzorka je negativan (ili ispod donje granice detekcije kompleta) |
Napomena: ( 1) Ako su i FAM kanal i VIC kanal pozitivni u isto vrijeme, SARS-Cov-2 se smatra pozitivnim.
(2) Ako je FAM kanal ili VIC kanal pozitivan, a drugi kanal negativan, test treba ponoviti. Ako je u isto vrijeme pozitivan, bit će ocijenjen kao SARS-Cov-2 pozitivan, u protivnom će biti ocijenjen kao SARS-Cov-2 negativan.
Srodni proizvodi
-
Komplet za otkrivanje antitijela IgM/IgG na COVID-19
Komplet za otkrivanje protutijela COVID-19 IgM/IgG (metoda imunokromatografije koloidnog zlata) Priručnik za proizvod 【NAZIV PROIZVODA】Komplet za otkrivanje protutijela COVID-19 IgM/IgG （metoda imunokromatografije koloidnog zlata) 【SPECIFIKACIJE PAKIRANJA】 1 test/komplet, 10 testova/komplet 【 SAŽETAK】 Novi koronavirusi pripadaju rodu β. COVID-19 je akutna respiratorna zarazna bolest. Ljudi su općenito osjetljivi. Trenutno su pacijenti zaraženi novim koronavirusom glavni izvor...
-
Komplet za ekstrakciju ili pročišćavanje nukleinske kiseline
Komplet za ekstrakciju ili pročišćavanje nukleinske kiseline ili pohranjen na -20 ℃. Uzorak treba transportirati uvijanjem na 0 ℃. Uvod Komplet za ekstrakciju ili pročišćavanje nukleinske kiseline (metoda magnetskih kuglica) dizajniran je za automatizirano pročišćavanje RNK i DNK iz tjelesnih tekućina (kao što su brisevi, plazma, serum) pomoću automatiziranih instrumenata za ekstrakciju nukleinske kiseline. Tehnologija magnetskih čestica osigurava visokokvalitetnu DNA/RNA koja je prikladna za ...
-
Komplet za analizu antigena SARS-CoV-2 (imunokromatogram...
Komplet za analizu SARS-CoV-2 antigena (metoda imunokromatografije) Priručnik za proizvod 【IME PROIZVODA】Komplet za analizu antigena SARS-CoV-2 (metoda imunokromatografije) 【SPECIFIKACIJE PAKIRANJA】 1 test/komplet 【SAŽETAK】 Novi koronavirusi pripadaju rodu β. COVID-19 je akutna respiratorna zarazna bolest. Ljudi su općenito osjetljivi. Trenutno su pacijenti zaraženi novim koronavirusom glavni...
-
Komplet za analizu antigena SARS-CoV-2
Komplet za ispitivanje antigena SARS-CoV-2 (metoda imunokromatografije) Priručnik za proizvode 【IME PROIZVODA】Komplet za ispitivanje antigena SARS-CoV-2 (metoda imunokromatografije) 【SPECIFIKACIJE PAKIRANJA】 1 test/komplet, 25 testova/komplet, 100 testova/komplet 【SAŽETAK 】 The Novi koronavirusi pripadaju β rodu. COVID-19 je akutna respiratorna zarazna bolest. Ljudi su općenito osjetljivi. Trenutno su pacijenti zaraženi novim koronavirusom glavni izvor infekcije; asimptomatski zaraženi ljudi...